Принцип метода
Молекулы образца ионизируются (для пептидов обычно методом электрораспыления или MALDI), после чего прибор измеряет отношение массы к заряду образовавшихся ионов. Из спектра вычисляется молекулярная масса соединения — с точностью, достаточной, чтобы отличать молекулы, различающиеся на массу одного аминокислотного остатка и меньше.
Почему это метод идентичности
У каждой пептидной последовательности есть расчётная молекулярная масса. Если измеренная масса совпадает с расчётной, материал согласуется с заявленной структурой; если нет — во флаконе другая молекула или значимая модификация. Именно поэтому в паре «HPLC + MS» хроматография отвечает за чистоту, а масс-спектрометрия — за идентичность.
Пределы метода
Совпадение массы — необходимый, но не абсолютный аргумент: молекулы с одинаковой массой (например, с перестановкой остатков) базовый масс-спектр не различит; для этого существуют методы фрагментации (MS/MS). Масс-спектр также не сообщает ни количество вещества, ни стерильность. Каждая характеристика подтверждается своим методом.
Источники
- Electrospray Mass Spectrometry and Tandem Mass Spectrometry of Synthetic Multicomponent Peptide Mixtures: Determination of Composition and Purity — Analytical Biochemistry, 219(2), 261–277 (PMID 8080083; DOI 10.1006/abio.1994.1266), 1994.
